高效in vitro包装λDNA试剂盒
● 包装效率高
1×108 pfu/μg Standard λDNA 以上
● 操作简单
Freeze/Thaw Lysate和Sonicated Extract已添加至1根管中
包装的大致过程：
①外壳前体的形成
②将在cos位点连接形成多联体的λ噬菌体DNA插入外壳前体
③ 在cos位点裂解
④噬菌体颗粒成熟
用途
● λ噬菌体DNA的in vitro包装
● cDNA文库构建
● 粘粒载体（Charomid DNA）的in vitro包装
试剂盒组成
● 包装提取物 30 μL×3 支（黄色管）
● λDNA标准品 20 μL×1 本（透明管）
● 大肠杆菌VCS257指示物 10 μL×1 本（蓝色管）
※ 产品签收后，请立即放入-80℃冷冻室中储存，请勿使用液氮。
※ 解冻后的包装提取物无法再次储存，请在解冻后立即使用，并在单次实验中使用完毕。
使用示例
以下为使用本试剂盒中包含的λ DNA标准品（0.04 μg/μL）进行对照实验的步骤。
< λ噬菌体DNA的in vitro包装>
为避免产生气泡，通过移液或使用吸头混合溶液时，请使用口径较大的吸头（或将吸头剪去约0.5 cm）。
A 包装的反应
① 将包装提取物从-80℃的冷冻库中取出后置于冰上，并迅速溶解（无需Tapping）。
② 加入1~6 μL DNA溶液（~1 μg/μL）※1），使用吸头混匀。（注意不要起泡）
③ 室温（约22℃）下静置1~2 h。
④ 加入0.5~1 mL SM Buffer (Phage Buffer)※2）平稳倒置进行混合（如需在4℃下保存数日，则需添加1滴氯仿）。
B-1 宿主菌的制备
① 向2 mL的LB broth中添加70 μL的20%麦芽糖，制备培养基。通过菌落分离※3）获得大肠杆菌VCS257的单菌落，接种至培养基，并于37℃下摇瓶培养过夜。
② 取1 mL菌液至1.5 mL离心管中，离心（1,500×g，5 min）后去除上清，向获得的沉淀中加入0.5 mL的10 mM MgCl2（或MgSO4），使用搅拌器悬浊后置于冰中（此步骤中稀释的菌液需立即用于B-2②）。
B-2 导入宿主菌
① 稍微离心（3,000×g，5ec）包装反应后的噬菌体液，沉降残留，使用SM Buffer 105倍（100,000倍）稀释※4）上清。
② 向15 mL管中加入100 μL的B-1②制备的菌液和100 μL的B-2①中105倍稀释的噬菌体液，吹打混匀后在室温（约22℃）下放置15 min。
③ 迅速与50℃左右保温的3 mL M Top琼脂（LB Top琼脂）※5）混合，倒入已凝固的LB平板上。
④ 待倒入的M Top琼脂充分凝固后，倒置使培养基部分朝上，在37℃下静置培养过夜。
⑤ 计数形成的噬菌斑数量，计算包装效率。
※1）进行对照实验时，需添加5 μL（0.2 μg）λDNA标准品（0.04 μg/μL）。根据对照试验中得到的包装效率，如出现重组DNA包装效率低的情况，请探讨DNA溶液的浓度。
※2）SM Buffer (Phage Buffer)：
以上成分添加H2O至500 mL，高压灭菌后在4℃下储存。
※3）在LB平板（不含抗生物质）上使用划线培养法，挑选出与其他菌落分离开的单菌落。
※4）稀释示例（使用搅拌器混匀）
※5）M Top琼脂（LB Top琼脂）
以上成分添加H2O至1 L，高压灭菌后在4℃下储存。
使用时可通过微波炉等加热溶解，取所需量，加入经过滤灭菌的1 M MgCl2至最终浓度为10 mM，并在约50 °C 的水浴中保温。
注意事项
● 本产品对甲基化DNA有轻微的限制活性，因此在包装高度甲基化的基因组DNA时效率可能会降低。
● 当使用含有酒精共沉淀剂（如乙醇胺）的DNA时，效率也会降低。
参考文献
1）Sambrook, J. et al. :“ Molecular Cloning”, A Laboratory Manual, 2nd ed., 2, 3（1989）
2）Rosenberg, S. M. et al. : Gene., 38, 165（1985）
3）Rosenberg, S. M. et al. : Gene., 39, 313（1987）
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